МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ СИНТЕЗ 2Н- И 13С-МЕЧЕННЫХ АМИНОКИСЛОТ РАЗЛИЧНОГО УРОВНЯ ИЗОТОПНОГО ОБОГАЩЕНИЯ МЕТИЛОТРОФНЫМИ МИКРООРГАНИЗМАМИ

Методом микробиологического синтеза получены и исследованы масс-спектрометрией электронного удара 2H- и 13С-меченые секре- тируемые аминокислоты L-фенилаланин-продуцирующего штамма Brevibacterium methylicum и L-лейцин-продуцирующего штамма Methylobacillus flagellatum и аминокислотные остатки суммарных белков биомассы при выращивании бактерий на средах, содер- жащих в качестве источников стабильных изотопов [2Н]метанол, [13С]метанол и 2Н2О. Для масс-спектрометрического анализа уров- ней включения стабильных изотопов 2H и 13С в молекулы аминокислот их мультикомпонентные смеси в составе культуральных жидкостей и белковых гидролизатов (гидролиз в 6 М 2НСl (3% фенол) и 2 М Ва(ОН)2) модифицировали в N-бензилоксикарбонил- производные аминокислот и метиловые эфиры N-5-(диметиламино)нафталин-1-сульфонил-производных аминокислот, которые разделяли методом ОФ ВЭЖХ. Синтезированные [2H]- и [13C]аминокислоты представляли собой смеси, различающиеся количеством включенных в молекулу изотопов. Уровни включения 2Н и 13С в молекулы секретируемых аминокислот и аминокислотные остатки суммарных белков биомассы варьируют в зависимости от содержания 2H- и 13C-меченых субстратов в ростовых средах и различа- ются для разных аминокислот (до 20,0 ат.% для L-лейцина/изолейцина и до 97,5 ат.% для L-аланина).