Перейти
на сайт журнала "Врач" |
Перейти на сайт журнала "Медицинская сестра"
|
Перейти на сайт журнала "Фармация"
|
Перейти на сайт журнала "Молекулярная медицина"
|
Перейти на сайт журнала "Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии"
|
Журнал включен в российские и международные библиотечные и реферативные базы данных
ВАК (Россия)
|
РИНЦ (Россия)
|
Эко-Вектор (Россия)
|
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИСТОЧНИКА И ПОДБОР РЕЖИМА ЭКСТРАГИРОВАНИЯ МЕТАБОЛИТОВ TRICHODERMA ATROBRUNNEUM ВКПМ F-1434, ОБЛАДАЮЩИХ АНТИБИОТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ В ОТНОШЕНИИ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ ГРУППЫ ENTEROBACTERICEAE
DOI: https://doi.org/10.29296/25877313-2023-07-03
Номер журнала:
7
Год издания:
2023
Актуальность. Большой практический интерес представляют антибиотические соединения микробного происхождения. В связи с этим акту-альным является определение источника и подбор режима экстрагирования биологически активных метаболитов микробного продуцента с це-лью дальнейшей разработки технологии их получения.
Цель исследования – определение источника и подбор режима экстрагирования метаболитов Trichoderma atrobrunneum ВКПМ F-1434, обла-дающих антибиотической активностью.
Материал и методы. Объект исследования – штамм T. atrobrunneum ВКПМ F-1434, синтезирующий низкомолекулярные бактериостатические соединения в отношении Enterobactericeae. Продуцент культивировали в глубинных условиях в течение 5 суток, при температуре 28 оС, с лими-тированием сахарозы до 50% навески стандартного состава среды Чапека. Экстракт биомассы и культуральную жидкость продуцента очищали центрифугированием, супернатанты исследовали на антагонизм. Выделение активных компонентов проводили одноступенчатой смесительно-отстойной экстракцией. Полноту извлечения определяли, варьируя объем экстрагента и время взаимодействия с культуральной жидкостью. Элюенты для тонкослойной хроматографии (ТСХ) определяли методом главных компонент. Экстракт разделяли нормально-фазовой ТСХ на непо-движной фазе Sorbifil, варьируя соотношением растворителей от 10А:0Б до 0А:10Б с шагом 1.2х20 см. Препаративно фракции получали колоноч-ной гель-проникающей хроматографией с неподвижной фазой Sephadex G-15, размер частиц 40–120 мкм. Подвижная фаза – диметилсульфоксид (ДМСО). Молекулярную массу рассчитывали из отношений Rf фракции к Rf свидетелей.
Результаты. Максимальная чувствительность тест-культуры показана в опыте с препаратом культуральной жидкости. Наиболее доступными экстрагентами для извлечения метаболитов являлись этилацетат и бутанол. Наибольшее значение полноты извлечения достигнуто при взаимо-действии равных объемов экстрагента и культуральной жидкости в течение 180 мин. Методом главных компонент определены оптимальные по-движные фазы: I – гексан: хлороформ; II – гексан : ацетон; III – гексан : ацетон : метанол (10%). Изолированы три фракции, у каждой опреде-лена бактериостатическая активность, рассчитано Rf и теоретически вычислены молекулярные массы, а также коэффициенты антибиотической активности.
Выводы. Компоненты культуральной жидкости T. atrobrunneum ВКПМ F-1434, обладающие бактериостатической активностью, могут быть экс-трагированы при перемешивании в течение 3 ч равных объемов этилацетата и культуральной жидкости и определены в экстракте с помощью ТСХ на силикагеле с импрегнированным метанолом в системе элюентов гексан и ДМСО 6:4.
Ключевые слова:
экстрагирование
метаболиты
культуральная жидкость
бактериостатическая активность
антибиотическая активность.
Для цитирования:
Гнеушева И.А., Лушников А.В., Коношина С.Н. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИСТОЧНИКА И ПОДБОР РЕЖИМА
ЭКСТРАГИРОВАНИЯ МЕТАБОЛИТОВ
TRICHODERMA ATROBRUNNEUM ВКПМ F-1434,
ОБЛАДАЮЩИХ АНТИБИОТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ
В ОТНОШЕНИИ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ ГРУППЫ ENTEROBACTERICEAE
. Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии, 2023; (7): 20-https://doi.org/10.29296/25877313-2023-07-03
Список литературы:
- Садыкова В.С., Кураков А.В., Коршун В.А. и др. Анти-фунгальная активность штамма T. citrinoviride ВКПМ F-1228 – продуцента пептаиболов в условиях жидкофаз-ного и твердофазного культивирования. Успехи медицин-ской микологии. 2016; 16: 164–166.
- Садыкова В.С., Кураков А.В., Коршун В.А. и др. Об-разование штаммом Trichoderma citrinoviride TYVI 4/11 антибиотиков-пептаиболов. Проблемы медицинской ми-кологии. 2015. 1: 41–46.
- Szekeres A., Leitgeb B., Kredics L., et al. Peptaibols and related peptaibiotics of Trichoderma. Acta Microbiol Immunol Hung. 2005; 52: 137–168.
- Куварина А.Е., Кураков А.В., Садыкова В.С. и др. Не-рибосомальные пептиды грибов: биологическая актив-ность и их перспективы в медицине. Проблемы медицин-ской микологии. 2016; 18(3): 36–41.
- Mukherjee P.K., Horwitz B.A., Kenerley C.M. Secondary metabo-lism in Trichoderma a genomic perspective. Microbiology. 2012; 158: 35–45.
- Патент РФ 2710783. Штамм Trichoderma atrobrunneum, обладающих антибактериальной активностью в отноше-нии возбудителя сибирской язвы. Патентообладатель: ФГБОУ ВО «Орловский государственный аграрный уни-верситет имени Н.В. Парахина». Номер заявки: 2019102438. Дата регистрации: 29.01.2019. Дата публикации: 13.01.2020.
- Садыкова В.С., Кураков А.В., Куварина Е.А. и др. Ан-тимикробная активность штаммов грибов рода Trichoderma из Средней Сибири. Прикладная биохимия и микро-биология. 2015; 51(3): 1–9.
- Определение чувствительности микроорганизмов к анти-бактериальным препаратам: Методические указания. МУК 4.2.1890-04. М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России. 2004.
- Гнеушева И.А., Лушников А.В. Подбор оптимального сос-тава питательной среды и условий глубинного культивиро-вания микробного продуцента бактериостатических соединений. Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю.А. Овчинникова. 2023; 15(1): 13–24.
- ОФС.1.2.1.0005.15. Общая фармакопейная статья. Раст-воримость. Утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749. Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том I.
- Айвазян С.А., Бухштабер В.М., Енюков И.С., Мешалкин Л.Д. Прикладная статистика. Классификация и снижение размерности. М.: Финансы и статистика, 1989. 607 с.
- Гнеушева И.А., Павловская Н.Е., Лушников А.В., Маркина О.А. Определение оптимальной среды и условий глу-бинного культивирования продуцента бактериостати-ческих метаболитов Trichoderma atrobrunneum ВКПМ F-1434. Вестник биотехнологии и физико-химической биологии им. Ю.А. Овчинникова. 2019; 15(1): 10–16.