ВЫБОР КЛЕТОЧНОЙ ЛИНИИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ШТАММА-ПРОДУЦЕНТА РЕКОМБИНАНТНОГО ФОЛЛИКУЛОСТИМУЛИРУЮЩЕГО ГОРМОНА ЧЕЛОВЕКА

DOI: https://doi.org/10.29296/25877313-2020-03-01
Скачать статью в PDF
Номер журнала: 
3
Год издания: 
2020

В.С. Монахова биолог, ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов» (Санкт-Петербург) E-mail: v.s.monakhova@hpb.spb.ru Н.В. Пигарева к.м.н., вед. биолог, ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов» (Санкт-Петербург) А.С. Симбирцев чл.-корр. РАН, д.м.н., профессор, науч. руководитель, ФГУП «Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов» (Санкт-Петербург)

Фолликулостимулирующий гормон – это один из важнейших гормонов репродуктивной системы человека, который широко используется во вспомогательных репродуктивных технологиях. Выбор штамма-продуцента рекомбинантного фолликулостимулирующего гормона человека (рчФСГ) одна из ключевых задач биотехнологического процесса. Цель работы. Целью работы являлось получение стабильной клеточной линии, продуцирующей рчФСГ, с использованием двух различных ро-дительских клеточных линий СНО. Материалы и методы. Для получения стабильных клонов, продуцирующих рчФСГ, были использованы две клеточные линии – СНО-К1 и СНО-DXB 11, адаптированные к культивированию в бессывороточной среде. Подсчет клеток и оценку клеточной жизнеспособности осуществляли с помощью окраски трипановым синим. Концентрацию рчфСГ определяли методом иммуноферментного анализа, подлинность белка определяли ме-тодом вестерн-блотинга. Результаты. Четыре наиболее продуктивных клона, полученные с использованием клеточной линии CHO-DXB 11, были отобраны после трех этапов скрининга – отбор пула, селекция клонов и амплификация с использованием метотрексата. Наибольшей продуктивностью в течение 6 дней культивирования обладал клон CHO-FSH 11/24 – 7,1±0,6 мг/л. Три клона были выбраны после траснфекции и отбора клонов с использова-нием клеточной линии CHO-K1. Клон CHO-FSH 91 обладал наибольшей продуктивностью после 6 дней культивирования – 10,8±0,9 мг/л. Молеку-лярные массы препаратов рчФСГ, полученных от разных клеточных линий-продуцентов, совпадали с молекулярной массой коммерческого пре-парата «Гонал Ф» (Merck Serono).Выводы. Продуцент, полученный с помощью клеточной линии СНО-К1, будет использован для дальнейших экспериментов.

Ключевые слова: 
штамм-продуцент
фолликулостимулирующий гормон человека
суспензионные клеточные линии СНО
Для цитирования: 
Монахова В.С., Пигарева Н.В., Симбирцев А.С. ВЫБОР КЛЕТОЧНОЙ ЛИНИИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ШТАММА-ПРОДУЦЕНТА РЕКОМБИНАНТНОГО ФОЛЛИКУЛОСТИМУЛИРУЮЩЕГО ГОРМОНА ЧЕЛОВЕКА . Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии, 2020; (3): -https://doi.org/10.29296/25877313-2020-03-01

It appears your Web browser is not configured to display PDF files. Download adobe Acrobat или click here to download the PDF file.

Список литературы: 
  1. Latash W.D., Karande V.C., Klipstein S. The development of recombinant follicle stimulating hormone (rFSH) for use in the treatment of infertility: new solutions to old challenges. Reviews in Gynaecological Practice. 2004; 4:203-210.
  2. Keene J.L., Matzuk M.M. et al. Expression of biologically active human follitropin in chinese hamster ovary cells. The Journal of Biological Chemistry. 1989; 264(9):4769-4775.
  3. Olijve W., Boer W. et al. Molecular biology and biochemistry of human recombinant follicle stimulating hormone (Puregon®). Molecular Human Reproduction. 1996; 2(5):371-382.
  4. NA K.H., Seo K.S., Kim W.B., Kim S.-Ch., Lee S.-H., Lee K.S. Purification and Characterization of Recombinant Human Follicle Stimulating Hormone Produced by Chinese Hamster Ovary Cells. J. Microbiol. Biotechnol. 2005; 15(2):395-402.
  5. Kim D.J., Seok S.-H., Baek M.-W., Lee H.-Y., Juhn J.-H., Lee S. et al. Highly expressed recombinant human follicle-stimulating hormone from Chinese hamster ovary cells grown in serum-free medium and its effect on induction of folliculogenesis and ovulation. 2010; 93(8):2652-2660.
  6. Патент № 2615447 (РФ). Синтетическая ДНК, кодирующая интерлейкин-7 человека, содержащий ее экс-прессионный вектор (варианты), штамм-продуцент интер-лейкина-7 человека и способ получения интерлейкина-7 человека. Ищенко А.М., Кудлинг Т.В., Петров А.В., Пигарева Н.В., Протасов Е.А., Симбирцев А.С. 2017. (Patent № 2615447 (RF). Sinteticheskaya DNK, ko-diruyushchaya interlejkin-7 cheloveka, soderzhashchij ee eks-pressionnyj vektor (varianty), shtamm-producent inter-lejkina-7 cheloveka i sposob polucheniya interlejkina-7 cheloveka. Ishchenko A.M., Kudling T.V., Petrov A.V., Pigareva N.V., Protasov E.A., Simbircev A.S. 2017).
  7. Патент № 2616273 (РФ). Синтетическая ДНК, кодиру-ющая антимюллеров гормон человека, содержащий ее экспрессионный вектор pTVK4pu/MISOPT и штамм клеток яичников китайского хомячка CHO-MIS – продуцент рекомбинантного антимюллерового гормона человека. Петров А.В., Карасев М.М., Кудлинг Т.В., Пигарева Н.В., Сергеева В.Е., Трофимов А.В., Ищенко А.М., ГорбуновА.А.,Вахрушев А.В., Симбирцев А.С. 2017. (Sinteticheskaya DNK, kodiruyushchaya antimyullerov gormon cheloveka, soderzha-shchij ee ekspressionnyj vektor pTVK4pu/MISOPT i shtamm kletok yaichnikov kitajskogo homyachka CHO-MIS – producent rekombinantnogo antimyullerovogo gormona cheloveka. Patent № 2616273 (RF). Petrov A.V., Karasev M.M., Kudling T.V., Pigareva N.V., Sergeeva V.E., Trofimov A.V., Ishchenko A.M., Gorbunov A.A., Vahrushev A.V., Simbircev A.S. 2017).
  8. Betts Z., Dickson A.J. Ubiquitous Chromatin Opening Elements (UCOEs) effect on transgene position and expression stability in CHO cells following methotrexate (MTX) amplification. Biotechnol J. 2016; 11(4):554-641.