РАЗРАБОТКА И ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКИ ВЭЖХ-МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ НОВОГО ПРОИЗВОДНОГО ВАЛЬПРОЕВОЙ КИСЛОТЫ И 1,3,4-ТИАДИАЗОЛА В ПЛАЗМЕ КРОВИ КРОЛИКОВ ДЛЯ ФАРМАКОКИНЕТИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

DOI: https://doi.org/10.29296/25877313-2020-08-04
Номер журнала: 
8
Год издания: 
2020

А.С. Малыгин аспирант, кафедра фармакологии и клинической фармакологии, ФГБОУ ВО «Тверской государственный медицинский университет» Минздрава России (г. Тверь); ORCID ID 0000-0003-1955-5105 E-mail: dr.a.s.m@yandex.ru Н.С. Попов к.фарм.н., ассистент, кафедра фармации, ФГБОУ ВО «Тверской государственный медицинский университет» Минздрава России (г. Тверь); ORCID ID 0000-0002-1792-7414 М.А. Демидова д.м.н., профессор, зав. кафедрой фармации, ФГБОУ ВО «Тверской государственный медицинский университет» Минздрава России (г. Тверь); ORCID ID 0000-0002-0270-8809 Н.А. Шатохина к.м.н., доцент, кафедра фармакологии и клинической фармакологии, ФГБОУ ВО «Тверской государственный медицинский университет» Минздрава России (г. Тверь); ORCID ID 0000-0001-6970-1313 E-mail: tgmu-nauka@mail.ru

Цель исследования. Разработка и валидация методики ВЭЖХ-масс-спектрометрического определения нового производного вальпроевой кис-лоты и 1,3,4-тиадиазола в плазме крови кроликов. Материал и методы. Объектом исследования явился N-(5-этил-1,3,4-тиадиазол-2-ил)-2-пропилпентанамид (вальпразоламид) – новое противо-эпилептическое средство из группы тиадиазоловых производных вальпроевой кислоты. Определение вальпразоламида в плазме крови кроликов осуществляли с помощью высокоэффективного жидкостного хроматографа Agilent 1260 Infinity II (Agilent Technologies, Германия). В качестве де-тектора использовали тройной квадрупольный масс-спектрометр ABSciex QTrap 3200 MD (ABSciex, Сингапур) с электрораспылительным источни-ком ионов (TurboV с зондом Turbo Ion Spray). Для разработанной методики оценивали селективность, перенос пробы, линейность, правильность, прецизионность, матричный эффект, степень извлечения вальпразоламида. Результаты. Разработана методика ВЭЖХ-масс-спектрометрического определения вальпразоламида в плазме крови кроликов (аналитическая колонка Phenomenex Synergi C18 4 мкм 2,0×50 мм, градиентное элюирование: 0–1 мин 10%-ный водный раствор ацетонитрила; 1–3 мин линейное повышение концентрации ацетонитрила в смеси до 90%; 3–4 мин изократический участок с концентрацией ацетонитрила 90%; 4–5 мин кондици-онирование колонки 10%-ным раствором; скорость потока подвижной фазы – 0,6 мл/мин; объем вводимой пробы – 20 мкл; общее время гради-ентного элюирования – 5 мин; масс-спектрометрическое детектирование). Условия масс-детектирования: положительная поляризация, напряже-ние электроспрея 5500,0 В, потенциал декластеризации 41,0; давление газа завесы 20,0 psi, газа распыления – 40,0 psi, потенциал ввода 3,5 В. MRM-переходы для вальпразоламида составили m/z256,1 →m/z130,1 иm/z81,0. В качестве внутреннего стандарта использовали ацетазоламид (m/z 223,1→ m/z73,0). Выводы. Аналитический диапазон методики определения вальпразоламида составляет 1–1000 нг/мл. Разработанная методика является селек-тивной, точной, прецизионной и линейной, по всем параметрам соответствует требованиям по валидации биоаналитических методик.

Ключевые слова: 
ВЭЖХ-МС/МС
вальпроевая кислота
1
3
4-тиадиазол
противоэпилептические средства
масс-спектро¬метрия

Список литературы: 
  1. Фрейдкова Н.В., Пылаева О.В., Мухин К.Ю. Вальпарин ХР в лечении эпилепсии (обзор литературы и описание клинических случаев). Русский журнал детской неврологии. 2015; 10(3): 37–42.
  2. Perucca E. Pharmacological and therapeutic properties of valproate: a summary after 35 years of clinical expe-rience. CNS Drugs. 2012; 16(10): 695–714.
  3. Kaufmann D., Bialer M., Shimshoni J.A., Devor M., Yagen B. Synthesis and evaluation of antiallo-dynic and anticonvulsant activity of novel amide and urea derivatives of valproic acid analogues. J. Med. Chem. 2009. Nov 26; 52(22): 7236–7248.
  4. Pessah N., Yagen B., Hen N., Shimshoni J.A., Wlodarczyk B., Finnell R.H., Bialer M. Design and pharmaco-logical activity of glycinamide and N-methoxy amide derivatives of analogs and constitutional isomers of valproic acid. Epilepsy Behav. 2011 Nov; 22(3): 461–468.
  5. Trojnar M.K., Wierzchowska-Cioch E., Krzyzanowski M., Jargiełło M., Czuczwar S.J. New generation of valpro-ic acid. Pol. J. Pharmacol. 2004 May–Jun; 56(3): 283–288.
  6. Jain A.K., Sharma S., Vaidya A., Ravichandran V., Agrawal R.K. 1,3,4-Thiadiazole and its Derivatives: A Re-view on Recent Progress in Biological Activities. Chem. Biol. Drug. Des. 2013; 81: 557–576.
  7. Патент РФ № 2 672 887. 13.03. 2018. N-(5-Этил-1,3,4-тиадиазол-2-ил)-2-пропилпентанамид, обладающий противоэпилептической и обезболивающей активностями. Ска-чилова С.Я., Малыгин А. С., Попов Н.С., Демидова М.А.; владелец патента: «Всесоюзный научный центр по безопасности биологически активных веществ».
  8. Malygin A.S., Demidova M.A., Skachilova S.Ya., Shilova E.V. Synthesis of a novel amide derivative of valproic acid and 1,3,4-thiadiazole with antiepileptic activity.Bulletin of RSMU. 2020;1: 75–80.
  9. Береговых В.В. Валидация аналитических методик для производителей лекарств. Типовое руководство предприятия по производству лекарственных средств. М.: Литтерра. 2008; 18–65.
  10. Guidance for Industry: Bioanalyti-cal method validation. US Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration, Center for Drug Evolution and Research (CDER), US Government Printing Office, Wash-ington, DC. 2001.
  11. Guidance on the Investigation of Bioequivalence. European Medicines Agency (EMA). Committee for Medicinal Products of Human Use (CHMP). 2010.