ПОДХОДЫ К СТАНДАРТИЗАЦИИ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ СУБСТАНЦИИ НА ОСНОВЕ РЕКОМБИНАНТНОГО ЭНДОЛИЗИНА LYSECD7

DOI: https://doi.org/10.29296/25877313-2020-09-01
Номер журнала: 
9
Год издания: 
2020

Н.П. Антонова аспирант, науч. сотрудник, Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени Н.Ф. Гамалеи Минздрава России (Москва); Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова (Москва) E-mail: northernnatalia@gmail.com Д.В. Васина к.б.н., лаборант-исследователь, Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени Н.Ф. Гамалеи Минздрава России (Москва) E-mail: d.v.vasina@gmail.com В.Ю. Балабаньян д.фарм.н., доцент, Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова (Москва) E-mail: bal.pharm@mail.ru В.А. Гущин к.б.н., ст. науч. сотрудник, Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени Н.Ф. Гамалеи Минздрава России (Москва); Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова (Москва) E-mail: wowaniada@gmail.com

Актуальность. В условиях роста устойчивости бактерий к существующим лекарственным средствам (ЛС) литические ферменты бакте-риофагов, а именно эндолизины, привлекают особенное внимание исследователей как один из перспективных классов антибактериальных средств. Поскольку этот класс ЛС является достаточно новым, существует необходимость разработки подходов к стандартизации фармацевти-ческих субстанций (ФС) на основе эндолизинов для дальнейшего получения новых эффективных антибактериальных препаратов. Цель работы. Разработать подходы к стандартизации ФС на основе рекомбинантного эндолизина LysECD7, обладающего антибактериальным действием в отношении различных представителей грамотрицательных бактерий. Материал и методы. Подлинность и чистоту ФС эндолизина оценивали по ОФС.1.2.1.0023.15 ГФ XIV с помощью денатурирующего электрофо-реза в 16%-ном полиакриламидном геле. Специфическую антибактериальную активность ФС определяли с помощью разработанной методики оценки бактерицидного действия по снижению количества жизнеспособных бактерий культуры тест-штамма Acinetobacter baumannii Ts 50-16. Стерильность ФС устанавливали по ОФС.1.2.4.0003.15 ГФ XIV методом мембранной фильтрации. Содержание бактериальных эндотоксинов выяв-ляли по ОФС.1.2.4.0006.15 ГФ XIV с помощью хромогенного теста по конечной точке. Количественное содержание белка в ФС определяли по ОФС.1.2.3.0012.15 ГФ XIV колориметрическим методом с бицинхониновой кислотой. Результаты. Изложены современные подходы к стандартизации фармацевтической субстанции рекомбинантного фагового литического фер-мента - эндолизина LysECD7. Предложены основные методики контроля качества ФС LysECD7, включающие в себя такие показатели, как «Элек-трофорез в полиакриламидном геле» и «Специфическая активность» для подтверждения подлинности ФС, «Стерильность», «Бактериальные эн-дотоксины» и «Количественное определение». Выводы. Разработаны подходы к стандартизации ФС эндолизина LysECD7, включающие в себя такие показатели как «Подлинность», «Чисто-та» и «Количественное определение», которые могут обеспечить стабильные эффективность и безопасность ФС для дальнейших разработок инновационных антибактериальных ЛС

Ключевые слова: 
эндолизины
LysECD7
грамотрицательные бактерии
фармацевтическая субстанция
стандартизация
анализ качества

Список литературы: 
  1. Oliveira H., São-José C., Azeredo J. Phage-derived pep-tidoglycan degrading enzymes: challenges and future pro-spects for in vivo therapy. Viruses. 2018; 10(6): 292.
  2. Schmelcher M., Donovan D.M., Loessner M.J. Bacterio-phage endolysins as novel antimicrobials. Future Microbiol. 2012; 7(10): 1147–71.
  3. Назаров П.А. Альтернативы антибиотикам: литические ферменты бактериофагов и фаговая терапия. Вестник РГМУ. 2018; 1: 5–15.
  4. Антонова Н.П., Балабаньян В.Ю., Ткачук А.П. Макаров В.В., Гущин В.А. Физико-химические свойства и противомик-робная активность рекомбинантного фаголизина бактериофага kpp10, действующего на Pseudomonas aeruginosa. Вестник РГМУ. 2018; 1: 22–9.
  5. Lood R., Winer B.Y., Pelzek A.J. et al. Novel phage Lysin ca-pable of killing the multidrug-resistant gram-negative bacterium Acinetobacter baumannii in a mouse bacteremia model. Antimicrob. Agents Chemother. 2015; 59(4): 1983–91.
  6. Larpin Y., Oechslin F., Moreillon P. et al. In vitro characteri-zation of PlyE146, a novel phage lysin that targets Gram-negative bacteria. PLoS ONE. 2018; 13(2): e0192507.
  7. Antonova N.P., Vasina D.V., Lendel A.M. et al. Broad bacte-ricidal activity of the Myoviridae bacteriophage lysins LysAm24, LysECD7, and LysSi3 against Gram-negative ESCAPE pathogens. Viruses. 2019; 11(3): e284.
  8. Государственная Фармакопея Российской Федера-ции XIV издания. М. 2018.
  9. Федеральный закон от 12.04.2010 №61-ФЗ «Об обращении лекарственных средств».