Нажмите на эту строку чтобы перейти к Новостям сайта "Русский врач"

Перейти
на сайт
журнала
"Врач"
Перейти на сайт журнала "Медицинская сестра"
Перейти на сайт журнала "Фармация"
Перейти на сайт журнала "Молекулярная медицина"
Перейти на сайт журнала "Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии"
Журнал включен в российские и международные библиотечные и реферативные базы данных

ВАК (Россия)
РИНЦ (Россия)
Эко-Вектор (Россия)

ОСТАТОЧНОЕ СОДЕРЖАНИЕ БЕЛКА В БИООБРАЗЦАХ ПЛАЗМЫ КРОВИ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ (КРОЛИКОВ) ПОСЛЕ ПОДГОТОВКИ ПРОБ К АНАЛИЗУ МЕТОДОМ ВЭЖХ-УФ

DOI: https://doi.org/10.29296/25877313-2020-10-08
Скачать статью в PDF
Номер журнала: 
10
Год издания: 
2020

В.М. Косман к.фарм.н., ЗАО «Санкт-Петербургский институт фармации»(г.п. Кузьмоловский, Всеволожский р-н, Ленинградская обл.) E-mail: kosmanvm@doclinika.ru М.В. Карлина к.б.н., ЗАО «Санкт-Петербургский институт фармации» (г.п. Кузьмоловский, Всеволожский р-н, Ленинградская обл.)

Актуальность. Основное ограничение чувствительности ВЭЖХ-УФ-методик, широко используемых для анализа лекарственных веществ в био-логических образцах (плазме крови, тканях и органах), связано со значимым фоновым влиянием матриц биообразцов. Осаждение белков счита-ют наиболее простым, универсальным и результативным способом подготовки биообразцов к ВЭЖХ-анализу. Однако сведения об эффективности применяемых способов осаждения белков и уровне их остаточного содержания в анализируемых биопробах в доступной литературе ограниче-ны. Цель работы. Оценка остаточного содержания белка в биообразцах плазмы крови лабораторных животных (кроликов) после подготовки проб к анализу методом ВЭЖХ-УФ. Материал и методы. На примере плазмы крови кроликов после подготовки образцов к дальнейшему анализу, включающей осаждение кислы-ми растворами, ацетонитрилом и метанолом, оценено остаточное содержание белка спектрофотометрическими методами. Результаты. Показано, что метод Бредфорд позволяет получить более низкие по абсолютному значению результаты по сравнению с методом прямой спектрофотомерии. При использовании различных осадителей и их соотношений и двух режимов центрифугирования остаточное содер-жание белка, определённое по методу Бредфорд, составило примерно 0,02–0,4 мг/мл, что свидетельствует о практически полном осаждении белков (более 99,5%) и подтверждает корректность использования осадительной пробоподготовки для дальнейшего анализа проб методом ВЭЖХ-УФ. Наиболее предпочтительным с точки зрения минимального остаточного содержания белка является применение в качестве осадителя ацетонитрила; наибольший уровень белка обнаружен в пробах после обработки 15%-ным раствором хлорной кислоты, то есть применение этого осадителя наименее желательно для дальнейшего ВЭЖХ-анализа. Выводы. Осаждение является эффективным способом очистки биообразцов от белков, выявленные особенности применения различных оса-дителей могут быть использованы при создании биоаналитических методик, основанных на ВЭЖХ-анализе.

Ключевые слова: 
плазма крови
пробоподготовка
белок
остаточное содержание
Для цитирования: 
Косман В.М., Карлина М.В. ОСТАТОЧНОЕ СОДЕРЖАНИЕ БЕЛКА В БИООБРАЗЦАХ ПЛАЗМЫ КРОВИ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ (КРОЛИКОВ) ПОСЛЕ ПОДГОТОВКИ ПРОБ К АНАЛИЗУ МЕТОДОМ ВЭЖХ-УФ . Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии, 2020; (10): -https://doi.org/10.29296/25877313-2020-10-08

It appears your Web browser is not configured to display PDF files. Download adobe Acrobat или click here to download the PDF file.

Список литературы: 
  1. Косман В.М., Карлина М.В. Пожарицкая О.Н. Влияние условий пробоподготовки и режима хроматографирования на уровень фонового сигнала при ВЭЖХ-УФ-анализе плазмы крови. Ведомости НЦЭСМП. 2020; 2: 121-128.
  2. Polson C., Sarkar P., Incledon B., Raduvaran V., Grant R. Optimization of protein precipitation based upon effec-tiveness of protein removal and ioniza-tion effect in liquid chromatography–tandem mass spectrometry. Journal of Chromatographyю. 2003; 785 (2): 263-75.
  3. Alshammari T.M., Al-Hassan A.A., Hadda T.B., Aljofan M. Comprasion of different serum sample extraction metods and their suitability for mass spectrometry analysis. Saudi pharmaceutical journal. 2015; 63: 689–687.
  4. Косман В.М. Карлина М.В., Макарова М.Н. Опыт разработки биоаналитических методик методом ВЭЖХ с УФ-детектированием. Фармация. 2020; 69(3): 23–35.
  5. Досон Р., Элиот Д., Элиот У., Джонс К. Справочник биохимика: Пер. с англ. М.: Мир, 1991: 544 с.
  6. ОФС.1.2.3.00012.15 Определение белка. Государственная Фармакопея Российской Федерации. XIV изд. М.: МЗРФ, 2018; Т. 1-4: 7019 с.
  7. Krohn R.I. The Colorimetric De-tection and Quantitation of Total Pro-tein. Current Protocols in Cell Biology. 2002; 15: A.3H.1–28.
  8. Majors R.E. Sample preparation fundamentals for chromatography. Ag-ilent Inc: Canada. 2013: 364 p.
  9. Phree™. Phospholipid removal solutions. General Protocol. Phenomenex, USA, 2013: 12 p.
  10. Blanchard J. Evaluation of the relative efficacy of various techniques for deproteiniing plasma samples prior to high-performance liquid chromato-graphic analysis. J. of Chromatogr. 1981; 226: 455-60.
  11. Суховская И.В., Боровинская Е.В., Смирнов Л.П., Немова Н.Н. Сравнительный анализ методов определения концентраций белка – спектрофотометрии в диапазоне
  12. 200-220 нм и по Бредфорд. Труды Карельского научного центра РАН. 2010; 2: 68-71.
  13. Varga M. Textbook of rabbit medicine. Butterworth-Heinemann. 2013: 512 p.