Перейти
на сайт журнала "Врач" |
Перейти на сайт журнала "Медицинская сестра"
|
Перейти на сайт журнала "Фармация"
|
Перейти на сайт журнала "Молекулярная медицина"
|
Перейти на сайт журнала "Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии"
|
Журнал включен в российские и международные библиотечные и реферативные базы данных
ВАК (Россия)
|
РИНЦ (Россия)
|
Эко-Вектор (Россия)
|
ОСТАТОЧНОЕ СОДЕРЖАНИЕ БЕЛКА В БИООБРАЗЦАХ ПЛАЗМЫ КРОВИ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ (КРОЛИКОВ) ПОСЛЕ ПОДГОТОВКИ ПРОБ К АНАЛИЗУ МЕТОДОМ ВЭЖХ-УФ
DOI: https://doi.org/10.29296/25877313-2020-10-08
Номер журнала:
10
Год издания:
2020
Актуальность. Основное ограничение чувствительности ВЭЖХ-УФ-методик, широко используемых для анализа лекарственных веществ в био-логических образцах (плазме крови, тканях и органах), связано со значимым фоновым влиянием матриц биообразцов. Осаждение белков счита-ют наиболее простым, универсальным и результативным способом подготовки биообразцов к ВЭЖХ-анализу. Однако сведения об эффективности применяемых способов осаждения белков и уровне их остаточного содержания в анализируемых биопробах в доступной литературе ограниче-ны. Цель работы. Оценка остаточного содержания белка в биообразцах плазмы крови лабораторных животных (кроликов) после подготовки проб к анализу методом ВЭЖХ-УФ. Материал и методы. На примере плазмы крови кроликов после подготовки образцов к дальнейшему анализу, включающей осаждение кислы-ми растворами, ацетонитрилом и метанолом, оценено остаточное содержание белка спектрофотометрическими методами. Результаты. Показано, что метод Бредфорд позволяет получить более низкие по абсолютному значению результаты по сравнению с методом прямой спектрофотомерии. При использовании различных осадителей и их соотношений и двух режимов центрифугирования остаточное содер-жание белка, определённое по методу Бредфорд, составило примерно 0,02–0,4 мг/мл, что свидетельствует о практически полном осаждении белков (более 99,5%) и подтверждает корректность использования осадительной пробоподготовки для дальнейшего анализа проб методом ВЭЖХ-УФ. Наиболее предпочтительным с точки зрения минимального остаточного содержания белка является применение в качестве осадителя ацетонитрила; наибольший уровень белка обнаружен в пробах после обработки 15%-ным раствором хлорной кислоты, то есть применение этого осадителя наименее желательно для дальнейшего ВЭЖХ-анализа. Выводы. Осаждение является эффективным способом очистки биообразцов от белков, выявленные особенности применения различных оса-дителей могут быть использованы при создании биоаналитических методик, основанных на ВЭЖХ-анализе.
Ключевые слова:
плазма крови
пробоподготовка
белок
остаточное содержание
Для цитирования:
Косман В.М., Карлина М.В. ОСТАТОЧНОЕ СОДЕРЖАНИЕ БЕЛКА В БИООБРАЗЦАХ ПЛАЗМЫ КРОВИ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ (КРОЛИКОВ) ПОСЛЕ ПОДГОТОВКИ ПРОБ К АНАЛИЗУ МЕТОДОМ ВЭЖХ-УФ
. Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии, 2020; (10): -https://doi.org/10.29296/25877313-2020-10-08
Список литературы:
- Косман В.М., Карлина М.В. Пожарицкая О.Н. Влияние условий пробоподготовки и режима хроматографирования на уровень фонового сигнала при ВЭЖХ-УФ-анализе плазмы крови. Ведомости НЦЭСМП. 2020; 2: 121-128.
- Polson C., Sarkar P., Incledon B., Raduvaran V., Grant R. Optimization of protein precipitation based upon effec-tiveness of protein removal and ioniza-tion effect in liquid chromatography–tandem mass spectrometry. Journal of Chromatographyю. 2003; 785 (2): 263-75.
- Alshammari T.M., Al-Hassan A.A., Hadda T.B., Aljofan M. Comprasion of different serum sample extraction metods and their suitability for mass spectrometry analysis. Saudi pharmaceutical journal. 2015; 63: 689–687.
- Косман В.М. Карлина М.В., Макарова М.Н. Опыт разработки биоаналитических методик методом ВЭЖХ с УФ-детектированием. Фармация. 2020; 69(3): 23–35.
- Досон Р., Элиот Д., Элиот У., Джонс К. Справочник биохимика: Пер. с англ. М.: Мир, 1991: 544 с.
- ОФС.1.2.3.00012.15 Определение белка. Государственная Фармакопея Российской Федерации. XIV изд. М.: МЗРФ, 2018; Т. 1-4: 7019 с.
- Krohn R.I. The Colorimetric De-tection and Quantitation of Total Pro-tein. Current Protocols in Cell Biology. 2002; 15: A.3H.1–28.
- Majors R.E. Sample preparation fundamentals for chromatography. Ag-ilent Inc: Canada. 2013: 364 p.
- Phree™. Phospholipid removal solutions. General Protocol. Phenomenex, USA, 2013: 12 p.
- Blanchard J. Evaluation of the relative efficacy of various techniques for deproteiniing plasma samples prior to high-performance liquid chromato-graphic analysis. J. of Chromatogr. 1981; 226: 455-60.
- Суховская И.В., Боровинская Е.В., Смирнов Л.П., Немова Н.Н. Сравнительный анализ методов определения концентраций белка – спектрофотометрии в диапазоне
- 200-220 нм и по Бредфорд. Труды Карельского научного центра РАН. 2010; 2: 68-71.
- Varga M. Textbook of rabbit medicine. Butterworth-Heinemann. 2013: 512 p.