РАЗРАБОТКА МЕТОДА СЕЛЕКТИВНОЙ ОЦЕНКИ МИКРОБИЦИДНОЙ АКТИВНОСТИ КОМПЛЕМЕНТА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА

DOI: https://doi.org/10.29296/25877313-2021-01-07
Номер журнала: 
1
Год издания: 
2021

С.В. Легковой аспирант, Санкт-Петербургский государственный университет E-mail: stanislav.legkovoy@gmail.com Е.С. Умнякова к.б.н., ст. науч. сотрудник, ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины» (Санкт-Петербург) E-mail: umnyakova.es@iemspb.ru М.Н. Берлов к.б.н., ст. науч. сотрудник, ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины» (Санкт-Петербург) E-mail: berlov.mn@iemspb.ru

Актуальность. Способность сыворотки крови ингибировать жизнедеятельность микроорганизмов в первую очередь обуслов¬лена присутствием в ней группы катионных факторов (лизоцим, β-лизин и др.) и белков системы комплемента. Напрямую комплемент способен вызывать лизис только некоторых грамотрицательных бактерий, в то время как катионные факторы пре¬имущественно активны в отношении грамположительных бактерий. Изучение вклада индивидуальных антимикробных ком¬понентов сыворотки и их сочетанного действия в её микробицидность поможет расширить понимание молекулярных механизмов врожденного иммунитета. Цель исследования. Разработка метода селективного истощения сыворотки по катионным факторам с сохранением функциональной активности системы комплемента. Материал и методы. В качестве исходного материала использовали пулированную сыворотку крови здоровых доноров. Истощение сыворотки осуществляли в процессе ее инкубации с суспензией карбоксиметилцеллюлозы. Для поиска оптимальных условий связывания катионных белков и пептидов варьировали либо концентрацию NaCl в пробе, либо объем вносимой суспензии полимера. Удаление катионных факторов из сыворотки оценивали по остаточной ферментативной активности лизоцима, функциональную активность комплемента – по гемолитической активности сыворотки в отношении эритроцитов кролика. Проведено сравнение микробицидностинативной и истощённой сыворотки в отношении грамположительной бактерии Listeria monocytogenes EGD. Результаты. Инкубация сыворотки с равным объемом суспензии карбоксиметилцеллюлозы в присутствии 0,1 M NaCl позволяет эффективно удалять катионные полипептиды, при этом функциональная активность комплемента существенно не меняется. Истощение сыворотки по катионным факторам значительно ослабляет ее антимикробную активность по сравнению с нативной сывороткой. Выводы. Разработан метод, позволяющий избирательно удалять катионные факторы из сыворотки крови. Благодаря этой процедуре становит-ся возможной селективная оценка микробицидной активности комплемента без влияния со стороны антимикробных катионных полипептидов сыворотки

Ключевые слова: 
врожденный иммунитет
система комплемента
лизоцим
β-лизин

Список литературы: 
  1. Merle N.S., Church S.E., Fremeaux-Bacchi V., et al. Complement system. Part I. Molecular mechanisms of activation and regulation.Front. Immunol. 2015; 6: 262.
  2. Ricklin D., Hajishengallis G., Yang K., et al. Complement: a key system for immune surveillance and homeostasis. NatureImmunol. 2010; 11: 785–97.
  3. Кокряков В.Н. Очерки о врожденном иммунитете. СПб: Наука, 2006; 262 с.
  4. Умнякова Е.С., Пашинская Л.Д., Кренев И.А. и др. Заболевания, связанные с дисрегуляцией системы ком-племента, и перспективы их лечения. Медицинский академический журнал. 2018; 18: 7–16.
  5. Biolchi A., De Angelis G., Moschioni M., et al. Multicomponent meningococcal serogroup B vaccination elicits cross-reactive immunity in infants against genetically diverse serogroup C, W and Y invasive disease isolates. Vaccine. 2020; 38: 7542–50.
  6. Liu D., Chen Z., Yuan Y., et al. Innate immune effectors play essential roles in acute respiratory infection caused by Klebsiellapneumonia. J. Immunol. Res. 2020; 2020: 291714.
  7. Chau N., Pérez-Morales D., Elhenawy W., et al. (p)ppGpp-dependent regulation of the nucleotide hydrolase PpnN confers complement resistance in Salmonella enterica serovar Typhimurium. Infect. Immun. 2020; IAI.00639-20.
  8. Berends E.T., Mohan S., Miellet W.R., et al. Contribution of the complement Membrane Attack Complex to the bactericidal activity of human serum. Mol. Immunol. 2015; 65: 328–335.
  9. Ragland S.A., Criss A.K. From bacterial killing to immune modulation: Recent insights into the functions of lysozyme. PLOS Pathog. 2017; 13: e1006512.
  10. Donaldson D.M., Tew J.G. Beta-lysin of platelet origin. Bacteriol. Rev. 1977; 41: 501–513.
  11. Parry R.M. (Jr.), Chandan R.C., Shahani K.M. A rapid and sensitive assay of muramidase. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1965; 119: 384–386.
  12. Umnyakova E.S., Gorbunov N.P., Zhakhov A.V., et al. Modulation of human complement system by antimicrobial peptide arenicin-1 from Arenicola marina. Mar. Drugs. 2018; 16: 480.
  13. Берлов М.Н., Кораблева Е.С., Андреева Ю.В. и др. Лактоферрин из нейтрофилов собаки: выделение, физико-химические и антимикробные свойства. Биохимия. 2007; 72: 551–559.