ПРИМЕНЕНИЕ ВЭЖХ-МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ 2-ЭТИЛ-6-МЕТИЛ-3-ГИДРОКСИПИРИДИНИЯ N-АЦЕТИЛ-6-АМИНОГЕКСАНОАТА В ПЛАЗМЕ КРОВИ КРЫС

DOI: https://doi.org/10.29296/25877313-2021-10-06
Номер журнала: 
10
Год издания: 
2021

Н.С. Попов к.фарм.н., зав. научно-исследовательской лабораторией, ФГБОУ ВО «Тверской государственный медицинский университет Минздрава России» (г. Тверь, Россия) Е.Н. Егорова д.м.н., зав. кафедрой биохимии с курсом клинической лабораторной диагностики, ФГБОУ ВО «Тверской государственный медицинский университет Минздрава России» (г. Тверь, Россия) М.Б. Петрова д.б.н., профессор, зав. кафедрой биологии, ФГБОУ ВО «Тверской государственный медицинский университет Минздрава России» (г. Тверь, Россия) Е.В. Андрианова ассистент, кафедра биохимии с курсом клинической лабораторной диагностики, ФГБОУ ВО «Тверской государственный медицинский университет Минздрава России» (г. Тверь, Россия) О.А. Шикунова ассистент, кафедра фармации, ФГБОУ ВО «Тверской государственный медицинский университет Минздрава России» (г. Тверь, Россия) E-mail: education@tvgmu.ru

Актуальность. Исследования эффективности применения 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния N-ацетил-6-аминогексаноата (ацексамата) в виде мази для лечения ожоговых ран у животных показали перспективность его использования в качестве регенеранта и репаранта. Одним из важ-ных этапов фармакологического изучения наружных лекарственных форм является оценка резорбции. Эти исследования требуют внедрения точных и воспроизводимых биоаналитических методик. Цель исследования. Разработка и валидация хромато-масс-спектрометрической методики количественного определения 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния N-ацетил-6-аминогексаноата в плазме крови крыс для последующей оценки резорбции вещества из лекар-ственных форм для наружного применения. Материал и методы. Объектом исследования явился 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния N-ацетил-6-аминогексаноата, количественное опре-деление которого в плазме крови крыс осуществляли с помощью ВЭЖХ Agilent Technologies 1260 Infinity II и масс-спектрометра AB Sciex 3200MD. Хроматограммы 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина, ацексамовой кислоты и сульфацетамида (внутренний стандарт) были построены в режиме MRM. Хроматографическое разделение аналитов проводили с использованием колонки Phenomenex Synerdgi C18 4 мкм, 2×50 мм, элюирование осуществляли в градиентном режиме смесью воды и абсолютного метанола. Анализировали калибровочные стандарты, образцы контроля каче-ства и холостые образцы. Для разработанной методики определяли аналитический диапазон, предел детектирования, нижний предел количе-ственного определения, линейность. Методику валидировали по показателям: селективность, матричный эффект, степень извлечения, перенос вещества, точность и прецизионность, стабильность. Разработанная методика была использована для оценки резорбции 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния N-ацетил-6-аминогексаноата из мази после однократного нанесения на поверхность ожоговых дефектов кожи крыс. Результаты. Через 2 ч после нанесения мази концентрации 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина и ацексамовой кислоты в плазме крови крыс составили соответственно 18,05±0,96 и 21,62±1,12 нг/мл в пересчете на 2-этил-6-метил-3-гидрокси-пиридиния N-ацетил-6-аминогексаноата. По-лученные результаты свидетельствуют о незначительной резорбции исследуемого вещества через поверхность ожогового дефекта. Выводы. Разработанная методика количественного определения 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния N-ацетил-6-аминогекса¬ноата в плазме крови крыс является селективной, точной, прецизионной, линейной и по всем параметрам соответствует требованиям к валидации биоаналити-ческих методик.

Ключевые слова: 
ВЭЖХ-МС/МС
хроматография
масс-спектрометрия
2-этил-6-метил-3-гидроксипиридин
N-ацетил-6-амино¬гексановая (ацексамовая) кислота

Список литературы: 
  1. Iismaa S.E., Kaidonis X., Nicks A.M., Bogush N., Kikuchi K., Naqvi N., Harvey R.P., Husain A., Graham R.M. Comparative regenera-tive mechanisms across different mammalian tissues. NPJ Regen. Med. 2018; 23 (3): 6. doi: 10.1038/s41536-018-0044-5.
  2. Макаревич П.И., Ефименко А.Ю., Ткачук В.А. Биохимическая регуляция регенеративных процессов факторами роста и цито-кинами: основные механизмы и значимость
  3. для регенеративной медицины. Биохимия. 2020; 85 (1): 15-33. doi: 10.31857/S0320972520010029.
  4. Пахомов Д.В., Блинова Е.В., Шимановский Д.Н., Кильмяшки-на М.Ф., Казаева М.А., Блинов Д.С., Нелипа М.В., Николаев А.В., Алхататнех Б.А., Скачилова С.Я., Богоявленская Т.А., Кытько О.В. Доказательные аспекты стимулирования зажив-ления неосложненной раны при локальном применении сереб-ряной соли ацексамовой кислоты. Оперативная хирургия и клиническая анатомия. 2020; 4 (1): 19-25. doi.org/10.17116/operhirurg2020401119.
  5. Блинова Е.В., Миронов М.А., Блинов Д.С. Регенерация инфици-рованной кожной раны на фоне топического воздействия со-лями N-ацетил-6- аминогексановой кислоты. Здоровье и обра-зование в XXI веке. 2018; 20 (7): 80-83.
  6. Popov N.S., Demidova M.A., Malygin A.S. Assessment of pharma-cological activity and bioavailability of the new derivative 1,3,4-thiadiazole. Research Results in Pharmacology. 2018; 4 (2): 27-46. doi 10.3897/rrpharmacology4.27582.
  7. Скачилова С.Я., Ермакова Г.А., Блинова Е.В. и др. Мазь для лечения ожогов 1-3 степени. Патент на изобретение № 2731175 зарегистрирован в Государственном реестре изобретений РФ 31.08.2020 г.
  8. Андрианова Е.В., Егорова Е. Н., Петрова М.Б., Пахо-
  9. мов М.А. Биохимические аспекты прорегенераторного действия 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния N-ацетил-6-аминогексаоната. Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю.А. Овчинникова. 2021; 17(1): 12-16.
  10. Guidance for Industry: Analytical procedures and method validation (draft). U.S. Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration, Center for Drug Evolution and Research (CDER). U.S. Government Printing Office: Washington, DC, 2000.
  11. Guideline on validation of bioanalytical methods (draft). European Medicines Agency. Committee for medicinal products for human use: London, 2009.
  12. Государственная фармакопея Российской Федерации XIII из-дание. М., 2015; 1: 1470
  13. Руководство по проведению доклинических исследований ле-карственных средств. М.: Гриф и К., 2012