ИЗУЧЕНИЕ КОЛЛАГЕНОЛИТИЧЕСКИХ СВОЙСТВ КОЛЛЕКЦИОННЫХ ШТАММОВ МИКРОМИЦЕТОВ ПРИ ДЛИТЕЛЬНОМ ХРАНЕНИИ

DOI: https://doi.org/10.29296/25877313-2021-03-05
Номер журнала: 
3
Год издания: 
2021

З.К. Никитина д.б.н., профессор, гл. науч. сотрудник, Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений (Москва, Россия) E-mail: nikitinaz@yandex.ru И.К. Гордонова к.б.н., вед. науч. сотрудник, Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений (Москва, Россия) E-mail: gordonova777@yandex.ru Э.М. Насибов аспирант, Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений (Москва, Россия)

Актуальность. Своеобразие коллекции микромицетов ФГБНУ ВИЛАР состоит в наличии штаммов способных гидролизовать коллаген, являясь потенциальными продуцентами коллагеназ. При поиске продуцентов биологически активных веществ важным показателем является стабиль-ность жизнеспособности и биосинтетической активности микроорганизмов. В связи с этим изучение коллагенолитической активности коллекци-онных штаммов мицелиальных грибов в процессе длительного хранения является актуальным для решения прикладных и фундаментальных проблем современной биотехнологии. Цель исследования. Изучение жизнеспособности и коллагенолитической активности коллекционных штаммов микромицетов при длительном хранении. Материал и методы. Объектом исследования являлись 16 штаммов 10 видов микромицетов из коллекции ФГБНУ ВИЛАР, относящиеся к родам Aspergillus, Beauveria, Paecilomyces, Penicillium, Phialophora. Культуры хранили под вазелиновым маслом при 4 С в течение 4 лет. После хранения оценивали жизнеспособность и коллагеназную активность микроорганизмов при поверхностном культиви-ровании. Кроме того, проводили глубинное культивирование грибов с определением удельной коллагенолитической активности (УКА) в фильтра-тах культуральной жидкости. Результаты. Проведенные исследования показали, что все микромицеты сохраняли жизнеспособность после 4 лет консервации при выбран-ных условиях. При поверхностном культивировании на модифицированной среде с заменой сахарозы на коллаген грибы образовывали колонии и хорошо выраженные зоны лизиса, что свидетельствовало о синтезе и секреции коллагенолитических ферментов. Обнаружены различия ско-ростей радиального роста и индексов лизиса у отдельных видов и штаммов микромимцетов. Сравнение индексов лизиса культур до и после хра-нения показало стабильность данного показателя. С использованием регрессионного и корреляционного анализа отобраны пять штаммов для проведения глубинного культивирования. Определение УКА в фильтратах культуральной жидкости подтвердило синтез и секрецию коллагено-литических ферментов исследованными микромицетами. Выводы. Консервация микромицетов на агаризованных средах Чапека под вазелиновым маслом при 4 С обеспечивает сохранение жизнеспо-собности и коллагенолитической активности. Подтверждена стабильность коллагенолитических свойств грибов в процессе длительного хране-ния. Для пяти штаммов, отобранных на основе регрессионного и корреляционного анализа, показана секреция коллагенолитических ферментов в культуральную среду при глубинном культивировании.

Ключевые слова: 
микромицеты
коллаген
коллагеназы
поверхностное и глубинное культивирование

Список литературы: 
  1. Похиленко В.Д., Баранов А.М., Детушев К.В. Методы длительного хранения коллекционных культур микро-организмов и тенденции развития. Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. Медицинские науки. 2009; 4(12): 99–121.
  2. Сухосырова Е.А., Яковлева М.Б., Никитина З.К., Быков В.А. Секреция коллагенолитических ферментов некоторыми видами дейтеромицетов. Технология живых систем. 2007; 4(4): 29-33.
  3. Гордонова И.К., Дмитриев Г.В., Никитина З.К. Поиск микроорганизмов – продуцентов кератиназ. Вопросы биологи-ческой, медицинской и фармацевтической химии. 2007; 4: 11-15.
  4. Никитина З.К., Гордонова И.К. Некоторые свойства кератинолитического фермента, секретируемого Cladosporium sphaerospermum. Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2011; 5: 36-40.
  5. Никитина З.К., Гордонова И.К. Выделение, очистка и био-химические свойства кератинолитического фермента, секре-тируемого Penicillium citrinum. Вопросы биологической, меди-цинской и фармацевтической химии. 2013; 9: 36-41.
  6. Можина Н.В., Руденская Г.Н. Коллагенолитические ферменты патогенных микроорганизмов. Биомедицинская химия. 2004; 50(6): 539-553.
  7. Яковлева М.Б., Никитина З.К., Хоанг Т.Л. Коллагеноли-тическая активность у некоторых видов дейтеромицетов при различных методах хранения. Прикладная биохимия и микробиология. 2006; 42: 489-492.
  8. Яковлева М.Б., Никитина З.К. Cтабильность микромицетов - продуцентов протеиназ при пролонгированных методах хранения. Вопросы биологической, медицинской и фармацев-тической химии. 2016; 4: 23-32.
  9. Lee Y.P., Takahashi T. An improved colorimetric determination of amino acids with the use of ninhydrin. Analytical Biochemistry. 1996; 14: 71-77.
  10. Яковлева М.Б., Никитина З.К. Скрининг-методы в био-технологии (Обзор). Часть 1. Поиск микроорганизмов – продуцентов ферментов. Вопросы биологической, медицин-ской и фармацевтической химии. 2013; 9: 36-41.
  11. Гордонова И.К., Никитина З.К. Использование мицелиальных грибов для вторичной переработки лекарственного растительного сырья. Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2020; 6. DOI: 10.29296/25877313-2020-06-05.
  12. Никитина З.К., Гордонова И.К., Насибов Э.М. Изучение коллекционных штаммов микромицетов для поиска культур с коллагенолитической активностью. Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2020; 23(7): 3-8. DOI: 10.29296/25877313-2020-07-04.